KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　
品牌：ZIQIBIO
CAS号：NULL
供应商：上海子起生物科技有限公司
数量：大于10个
保质期：2-3年4OO_　811 _　9081 I368I6I966Z
保存条件：4度或以下
基因**快速表达试剂盒使用说明书

名称　　　　　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　　
货号　　　　　 KIT-03112　 技术热线400-811-9081
包装规格　　　 一家实验室购买一套可**无限次使用
试剂盒内容　　（1）9种表达载体
　　　　　　　（2）2种穿刺菌种
　　　　　　　（3）1种抗生

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一、产品简介
二、基因克隆
三、基因表达
四、载体资料
五、相关产品4OO_　811 _　9081 I368I6I966Z
六、参考文献
七、试剂盒质量验收标准
联系人:杨先生
400-811-9081
　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　　
一、产品简介
原核表达系统近年来研究取得**性进展
1998年，美国Incyte Pharmaceutical公司华裔科学家Zhang Yang在《Protein expression andpurification》(vol12,159-165)上发表论文《Expression of Eukaryotic proteins insoluble form in Escherichia coli》，文章采用E.coli分子内伴侣DsbA技术将IGF-I、IGFBP-3、3Cproteinase、TGFb-2、STGFb-RII、BDNF、GDNF、mEGFBP、Leptin和GFP十个基因全部实现了可溶性表达，且表达量均大于25%。更为惊奇的是由于DsbA分子伴侣的作用使得拥有9个半胱氨酸的复杂结构的IGFBP-3能在E.coli内形成可溶性具生物活性的高表达重组蛋白。
2002年，美国冷泉港实验室出版的《ProteinScience》(2002,11:313-321)上发表了瑞典科学家Torleif《Rapid screening for improvedsolubility of small human proteins produced as fusion proteins in Escherichia coli》一文，从而揭开了原核**快速组合筛选表达系统用于蛋白组学研究的序幕。
　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　　
近年来Medline报导了大量利用原核表达获得有活性的可溶蛋白，现举例如下：GeneExpression methodIndexProinsulinDsbA fusionJ.Biotechnol 2001 84(2):175-85htPADsbA coexpressionAppl Environ Microbiol 1998 64(12):4891-6Bovine enterokinaseDsbA fusionBiotech nology(NY),1995,13(9):982-7MucinMBP fusionProtein Expr Purif 1999,15(1)146-54Human angiogeninOmpA signalBiochem Mol Biol Int1999,47(2):267-73Bacillus lipaseOmpA signalAppl Microbiol Biotechnol 1998 Apr;49(14):405-10HEV antigenThioredoxin fusionZhonghua shi yan he lin chuang bing du xue za zhi 2002,16(1):20-2P55 TNF receptorThioredoxin fusionProtein Expr purif 2001,23(2)226-32hLH/CG receptorThioredoxin fusionEndocrine 2001,14(2):205-12Pokeweed antiviral proteinMBP fusionProtein Expr Purif 1999,15(1)146-54
产品特色
本公司通过和留美学者合作，现向国内推出原核基因**快速表达试剂盒。它将九种表达载体包括分泌型、引导分泌型、胞内直接表达型、分子内伴侣协助折叠型、高度稳定伴侣型等系统的多克隆位点统一，同时统一了诱导表达剂和统一了培养基，一次可以同时克隆九种载体进行表达筛选，极大地节省宝贵的科研时间。其实，象美国Amgen、Gentech、Incyte这类**的生物技术公司也是采用多系统多载体同时筛选快速表达的策略。这一策略的**优势就是快速且成功率高。本系统非常适合高通量快速筛选大量未知基因，对基因组学和蛋白组学的研究是一个不可缺少的工具。
　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　　
1）提供详实的操作说明和丰富的参考文献。
2）下游多种亲和层析组合方便您快速纯化目的蛋白。
3）分子内伴侣和分泌表达能**限度避免包涵体形成，直接获得有活性可溶蛋白，这一点对于未知基因功能的研究很重要。
4）九套**表达载体同时克隆筛选，极大地节省您宝贵的科研时间。
5）T7溶菌酶和lacIq阻遏蛋白能起到严格控制诱导前表达的作用，同时强启动子、高拷贝复制子等方法结合可获得高达50%的表达量。
6）已有400多个基因通过该试剂盒而表达成功。4OO_　811 _　9081 I368I6I966Z
本试剂盒包括：穿刺菌株、***和统一多克隆位点的九种表达载体。用户只要扩增出一段不带终止密码子或带终止密码子的阅读框编码基因克隆进九种表达载体，可同时筛选，节省时间。一般两至三周可以筛选出表达菌株，在此基础上，进一步根据需要进行实验室菌株的优化从而成为工程菌株。
本试剂盒采用的技术路线如下：
您提供的基因ORF　　九种表达载体
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克隆
　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　　
　　　　ˉ诱导（小样）
　　　　　ˉSDS—PAGE分析
筛选出表达菌株
ˉ
发酵（中样）
ˉ
亲和层纯化融合蛋白
ˉ
纯化
ˉ4OO_　811 _　9081 I368I6I966Z
目标蛋白
由于大肠杆菌表达系统遗传背景清楚、易于大规模发酵等优点，尤其是近年来采用分子内伴侣的技术（如Trx、DsbA等）使得许多外源基因能在E.coli里正确折叠，如IL—11、GM—CSF、INF、 Insulin甚至包括结构复杂的tPA等均可获得正确折叠的重组可溶性活性蛋白，使得E.coli**快速表达系统仍然是分子生物学实验室一个不可缺少的工具。
本试剂盒包括冻干菌株、***和统一多克隆位点的九种表达载体。用户只要扩增克隆出一段不带终止密码子或者带终止密码子的阅读框编码基因克隆进九种表达载体，可同时筛选，节省时　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒　　
间。一般两至三周可以筛选出表达菌株，在此基础上，进一步根据需要进行实验室菌株的优化从而成为工程菌株。
pLLP—OmpA表达载体采用E.coli强启动lpp和OmpA分泌信号肽，同时在C端添加了6个His可采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。该表达载体成功地实现过人生长**的基因工程工业化。经多年临床验证，分泌型重组人生长**临床副反应大大低于包涵体型的重组人生长**。
pLLP—STII表达载体采用E.coli强启动lpp和STII分泌信号肽，同时在C端添加了6个His便于采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。STII信号肽引导能力强且易于被E.coli信号肽酶切割。即使**个氨基酸是半胱胺酸的干扰素也可以实现分泌表达。
pMBP—P表达载体采用 E.coli tac启动子和分泌型麦芽糖结合蛋白（maltose bindingprotein）同时选用凝血酶切割位点并在C端添加6个His便于采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。该表达系统在Medline里有大量的背景文献参考。它通过MBP引导分泌，可以实现许多基因在周质空间里正确折叠，如TPO（1-153aa）、GM—CSF、IL—2等。我们采用这一表达系统配合固相化的凝血酶成功地获得了正确折叠的rhGM—CSF，临床试用表明其副反应比包涵体型rhGM—CSF大大降低。该表达载体表达的蛋白还可通过Amylose亲和层析。
pMBP—C表达载体采用E.coli tac启动子和胞内可溶性麦芽糖结合蛋白（maltose bindingprotein），同时选用凝血酶切割位点并在C端添加6个His便于采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。该表达系统在Medline里有大量背景文献参考。它通过MBP胞内融合表达，表达产物可占菌体的20%—30%，可形成可溶性蛋白，也可形成包涵体。融合蛋白还可以通过　 KIT-03112　 基因**快速表达试剂盒